유세포 분석법은 서로 다른 단계에서 세포 사멸 또는 세포 죽음을 겪고 있는 세포의 집단을 측정하기 위한 유연한 다용도 분석법입니다. 세포 사멸 초기에 미토콘드리아는 세포막 전위를 상실하고 제 기능을 하지 못하여 cytochromeC 방출과 caspases의 활성화를 야기합니다. 유세포 분석법은 caspases3 및 7에 따라 특별한 절단 부위가 있는 프로브 분자를 사용하여 세포에서 활성화된 caspases의 감지를 가능하게 합니다. 초기 사멸 세포에서 이러한 활성화된 caspases에 의해 절단될 때, 프로브 분자는 핵으로 들어가 DNA와 결합하고 형광을 나타냅니다.
세포 사멸의 초기 단계에는 또한 내세포막에서 외층으로 phosphatidylserine(PS) 전이가 수반되어 세포외 환경에 노출됩니다. 세포막은 세포 사멸의 후기 단계에서 투과성을 띠며, 그 무결성과 선택적 물질 운반을 저해합니다. Annexin V와 같은 유세포 분석 시약은 초기 사멸 세포의 라벨링을 위해 세포막에 노출된 PS를 결합하는 데 사용될 수 있고, DNA 결합 염료 7-AAD는 세포의 라벨링에 사용될 수 있습니다.
고성능 유세포 분석기는 종종 고품질의 결과를 전달하기 위해 교육 또는 광범위한 경험을 필요로 합니다. Agilent NovoCyte 유세포 분석기는 초보자도 쉽게 접근할 수 있도록 설계되어 있어 가장 까다로운 과학자의 요구를 충족시킬 수 있습니다. 다음을 제공하는 유세포 분석기 라인에 대해 알아보세요.
작은 입자까지 검출 가능한 고품질 산란 분리능
다양한 유속에서 일관된 결과 제공
정확한 절대 세포 수가 지원되므로 참조 비드 불필요
간편한 유지보수, 자동 세척 주기
A Powerful Yet Affordable Flow Cytometer for Apoptosis Assays
NovoCyte 유세포 분석기는 신뢰할 수 있는 Agilent 품질로 제작되었으며 신뢰할 수 있는 성능을 제공하는 검증된 이력을 보유하고 있습니다. 수동 유지보수 또는 검출기 설정을 정기적으로 조정해야 하는 번거로움을 해소합니다. 고급 유체 설계 기능은 귀하가 필요로 하는 재현성을 제공하는 동시에 예약 및 자동 시작 및 종료, 자동 세척 주기, 배치 분석 및 보고 기능을 제공합니다. 빠르고 견고한 자동 시료 주입기를 사용하여 실험실을 떠난 후에도 유세포 분석기가 작업을 수행하고 시료를 수집하도록 합니다.
Detect Early and Late Apoptotic Cells using Annexin V and 7-AAD by Flow Cytometry
이러한 세포 사멸 분석은 staurosporine은 Jurkat T 세포와 HeLa 세포 모두에서 세포 사멸을 유도한다는 것을 보여주며, 세포 사멸의 초기 및 장기 단계에 대한 통찰력을 제공합니다. Staurosporine 처리 후 4시간 동안 아넥신 V-FITC 및 DNA 결합 염료 7-AAD를 사용한 phosphatidylserine을 통해 초기 및 후기 사멸 세포를 분석하였습니다. 세포는 Annexin V에서 양성 염색 시 초기 세포 사멸, Annexin-V 및 7-AAD 양성 염색에서는 후기 세포 사멸(또는 죽음)로 분류되었습니다.
Measure Mitochondrial Membrane Potential Loss in Early Apoptotic Cells
Jurkat T 세포는 이러한 유세포 분석 세포 사멸 분석에서 staurosporine으로 처리되며, 이어서 형광 염료 JC-1을 첨가합니다. JC-1은 세포 투과성이며 막 전위가 유지되는 동안 미토콘드리아 내부에 응집되어 PE 채널에서 형광을 방출합니다. 막 전위가 상실되면 JC-1은 미토콘드리아로 국소화되지 않고 단량체 형태로 세포질에 상주하며 FITC 채널에서 형광을 방출합니다. PE 대 FITC 형광 비율은 미토콘드리아 막 전위의 변화를 나타냅니다.
Using Flow Cytometry to Quantify Caspase 3 and 7
Activity in Early Apoptotic Cells
이러한 세포 사멸 분석에서는 staurosporine 처리된 Jurkat T 세포가 처리되지 않은 대조군 세포보다 더 많은 카스파제 활성을 보인다는 것을 보여줍니다. Jurkat T 세포는 1시간 또는 4시간 이내에 2µM의 staurosporine으로 처리되었고, 세포 투과성, DEVD-결합형 형광 핵산 결합 염료 및 7-AAD 염료로 염색되었습니다. 처리되지 않은 대조군 세포는 최소한의 카스파제 활성을 보이는 반면, staurosporine으로 처리된 세포는 Caspase3 및 7 활성(99.7%)이 유의미하게 증가하였습니다.
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