유세포 분석법은 단일 시료에서 서로 다른 세포 유형을 식별할 수 있는 능력으로 개별 세포의 증식을 측정하는 데 이상적입니다. 세포 증식의 정량 분석은 세포 성장과 분화에 대한 연구에 매우 중요하며, 신약 개발 중 화합물 독성과 종양 세포 성장 억제를 평가하는 데 사용됩니다. T 세포 증식에 대한 세대별 분석은 또한 세포 치료의 발전에 매우 중요합니다.
미토콘드리아 효소(MTT), 아데노신 삼인산(ATP), 세포 주기 관련 단백질 발현(Ki-67), 뉴클레오티드 아날로그(BrdU), 세포 추적 염료(CFSE) 측정을 포함하여 많은 검사가 세포 증식 측정에 사용됩니다. 이러한 검사의 대부분은 대량의 집단 분석을 제공하지만 개별 또는 혼합된 세포 집단을 측정하지는 않습니다.
이와 대조적으로, 유세포 분석법은 세포 증식, 생존력, 세포 주기, 개별 세포 또는 혼합 집단의 세포 사멸과 같은 세포 현상의 다중 파라미터 분석에 사용될 수 있습니다. Agilent NovoCyte 유세포 분석기가 어떻게 증식 분석을 간편하게 수행하는지 알아보세요.
작은 입자까지 검출 가능한 고품질 산란 분리능
다양한 유속에서 일관된 결과 제공
정확한 절대 세포 수가 지원되므로 참조 비드 불필요
간편한 유지보수, 자동 세척 주기
A Powerful Yet Affordable Flow Cytometer for Proliferation Assays
NovoCyte 유세포 분석기는 신뢰할 수 있는 Agilent 품질로 제작되었으며 신뢰할 수 있는 성능을 제공하는 검증된 이력을 보유하고 있습니다. 수동 유지보수 또는 검출기 설정을 정기적으로 조정해야 하는 번거로움을 해소합니다. 고급 유체 설계 기능은 귀하가 필요로 하는 재현성을 제공하는 동시에 예약 및 자동 시작 및 종료, 자동 세척 주기, 배치 분석 및 보고 기능을 제공합니다. 빠르고 견고한 자동 시료 주입기를 사용하여 실험실을 떠난 후에도 유세포 분석기가 작업을 수행하고 시료를 수집하도록 합니다.
Generational Analysis of T cell Proliferation Using Cell-Tracking Dyes
Primary T 세포에서 세포 분열을 구별하는 다른 세포 추적 염료의 능력을 시험하기 위해, PBMC에 ViaFluor488, CFSE 또는 CellTrace Violet이 라벨링 되었고, 그 후 anti-CD3 항체로 활성화하였습니다. 각 시료에서 CD4 및 CD8 T 세포의 증식을 분석하기 위해, NovoExpress 소프트웨어의 세포 증식 모듈을 사용하여 집단에 나타나는 피크/분열 수를 측정했습니다. 모든 시료에서 CD8 T 세포 집단의 증식이 CD4 집단보다 높았습니다.
Using Flow Cytometry to Measure Effects of anti-CD3 Antibody on T cell Proliferation
코팅 anti-CD3 항체는 0에서 1µg/mL로 적정하여 세포 증식을 유도하는 데 이상적인 농도를 측정하였습니다. 예상대로 anti-CD3 항체의 양이 증가하면서 T 세포의 증식이 증가하였으나, 1µg/mL의 항-CD3 항체를 이용한 경우 0.25µg/mL과 비교하여 분열 피크의 분리능을 개선하였습니다. 세포와 분열 지수를 나누는 빈도는 CD3의 모든 농도에서 CD4 및 CD8 집단에서 동일했지만, 증식 지수는 CD8 T 세포 집단에서 더 높았습니다.
Cell Cycle Analysis by Flow Cytometry in Response to Various Treatments
세포 분열을 조절하는 분자 메커니즘을 연구하는 것은 암과 같은 생리학적, 병태 생리학적 현상에 대한 이해의 핵심입니다. 특정 세포 주기 단계를 분석하기 위해 T 세포를 G1 및 G2/M에서 성장을 억제하는 것으로 알려진 화합물로 처리하였습니다. 5-fluorouracil (5-FU) 치료는 세포 주기의 G1 단계에 축적되는 세포 집단을 52.22%에서 70.07%로 증가시켰습니다. 반면 Paclitaxel 치료는 G2/M 단계 세포의 비율을 13.86%에서 66.58%로 증가시켰습니다.
Measuring Proliferation and Cell Division Using CFSE
CFSE 라벨의 세포가 분열한 경우, 염료가 딸세포 사이에 균등하게 분할되며, 염료가 지속적으로 희석되기 때문에 시간이 경과함에 따라 CFSE 형광 손실을 측정할 수 있습니다. 본 예시에서 Jurkat T 세포는 CFSE로 라벨링 되었고 24시간마다 CFSE 형광 측정을 얻습니다. 세포 증식은 CFSE 염료의 연속 희석으로 이어지며, 이는 특정 수의 세포 분열을 거친 모집단을 감지할 수 있게 합니다.